自组装多肽凝胶的构建及其在肝实质创伤性出血中的止血应用研究
Preparation of self-assembling peptide-based hydrogels and its application in traumatic hemorrhage of hepatic parenchymal
摘要目的 制备FLIVIGSII多肽(FI肽),探究其物理化学性质及其体外凝血和体内止血效应.方法 将FI肱与水混合,制备样品,直接观察FI肽水凝胶的状态,通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察其微观纤维结构,并通过动态光散射(dynamic light scattering,DLS)分析其纤维尺寸.将FI肽与3.8%柠檬酸钠抗凝处理后的健康人血液混合,直接观察FI肽的凝血效应,并通过SEM观察其血凝块的微观结构.溶血实验和CCK-8细胞毒性实验用于验证其生物相容性.最后,构建大鼠肝脏实质穿孔出血模型,将15只体质量为150 g的6~8周龄雌性SD大鼠按随机数字表法分为3组:对照组、FI肽组和纤维蛋白胶组,通过各组治疗后观察分析FI肽对肝脏实质创伤性出血的止血效应及其预后,并探讨其止血机理.结果 成功制备FI肽.FI肽与血液接触后快速成胶,使血液凝固形成血凝块.SEM结果显示FI肽与水混合后自组装形成纤维网状水凝胶.TEM结果验证FI肽在水中成胶后形成直径为(13.70±2.31)nm的纳米纤维,DLS结果验证其在水中形成多分散多尺寸(148.2~208.0 nm或575.0~807.0 nm)的纳米纤维.FI肽与血液混合后形成的纤维网状水凝胶包裹住红细胞,从而形成物理性止血屏障以在数秒内实现凝血.同时,FI肽水凝胶对正常肝细胞(L-O2)无细胞毒性,且不会造成红细胞溶血.在SD大鼠体内肝脏止血实验中,FI肽与血液接触时,迅速形成纳米纤维水凝胶,从而形成物理性止血屏障以在数秒内实现体内止血(止血时间<5 s).结论 FI肽具有快速、高效的止血效应,在肝脏实质创伤性出血的止血治疗中具有较好的临床应用前景.
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