视神经损伤诱导小胶质细胞表型变化与视网膜神经节细胞死亡的关系

Correlation of changes in retinal microglia phenotype with ganglion cell death in mice after optic nerve injury

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摘要目的探究视神经损伤后视网膜小胶质细胞表型改变与视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)死亡的关系.方法将6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为造模后1、3、7、14 d损伤组和Sham组,每组4只.对损伤组进行视神经钳夹(optic nerve crush,ONC),对Sham组行相同的手术操作但不夹持视神经;结合闪光视觉诱发电位(flash visual evoked potential,fVEP)和免疫荧光染色评估视神经损伤对小鼠视觉功能和RGCs数量的影响;RT-qPCR和免疫荧光染色检测视神经损伤对视网膜小胶质细胞表型变化的影响.结果 fVEP结果显示,与Sham组相比,损伤组的视觉传导功能随时间进展逐渐下降(P＜0.01).免疫荧光染色结果显示RGCs数量减少主要发生在损伤后7 d内(P＜0.01);同时视网膜小胶质细胞的数量在损伤后7 d达到峰值(P＜0.01).RT-qPCR显示与Sham组相比,ONC后7 d视网膜疾病相关型小胶质细胞(disease-associated microglia,DAM)及干扰素反应型小胶质细胞(interferon-responsive microglia,IRM)特征基因表达均显著增加(P＜0.01).免疫荧光染色提示DAM的数量在ONC后3 d达到峰值(P＜0.01),但随着时间的进展比例逐渐降低(P＜0.05);而IRM的数量及比例在ONC后7 d达到峰值(P＜0.01).相关性分析提示IRM的数量与神经节细胞死亡强烈相关(P＜0.01).结论视神经损伤后视网膜小胶质细胞由早期的DAM型向IRM型转化可能是RGCs死亡的重要原因.