摘要目的 探究DNA解旋酶PIF1在卵巢癌细胞增殖和DNA损伤中的作用及机制.方法 通过基因表达谱交互式分析平台(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)和Kaplan-Meier Plotter公共数据库分析PIF1基因在正常卵巢组织和卵巢癌组织中的相对表达量,以及PIF1表达量和卵巢癌患者总生存率的关系.通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立PIF1敲除的卵巢癌细胞.构建Rad51重组酶(Rad51 recombinase,Rad51)过表达的反转录病毒载体,进行PIF1敲除的ES-2卵巢癌细胞转染.采用Western blot评估PIF1敲除和Rad51过表达的效果;通过细胞计数、克隆形成实验和CCK-8评估细胞的增殖能力.选取32只6～8周龄BALB/c雌性裸鼠(体质量20～25 g),按随机数字表法分为4组(n=8):ES-2对照组、ES-2敲除组、OVCAR-3对照组和OVCAR-3敲除组,建立小鼠荷瘤模型评估卵巢癌细胞在体内的增殖能力.通过流式细胞术评估细胞的凋亡率和细胞周期;采用β-半乳糖苷酶活性检测评估卵巢癌细胞的衰老情况.应用Western blot和免疫荧光检测磷酸化组蛋白 H2AX(phosphorylated histone H2AX,γ-H2AX)的变化,评估 PIF1 敲除以及过表达 Rad51 对 DNA 损伤的影响,并检测PIF1和Rad51在卵巢癌细胞中的定位.结果 公共数据库分析结果显示,PIF1过表达与患者的总体生存率呈负相关(P＜0.001);且相比较正常卵巢组织,PIF1在卵巢癌组织中过表达(P＜0.05).CRISPR/Cas9技术介导的PIF1敲除可显著抑制卵巢癌细胞的增殖(P＜0.01)和克隆能力(P＜0.001),且在小鼠体内也得到验证(P＜0.05).流式细胞术显示,PIF1敲除促进卵巢癌细胞凋亡(P＜0.01),阻滞细胞周期(P＜0.01).此外,β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,PIF1敲除促进卵巢癌细胞衰老(P＜0.001).Western blot和CCK-8结果进一步显示,PIF1敲除促进卵巢癌细胞γ-H2AX蛋白表达增加(P＜0.05),并且抑制顺铂处理后的卵巢癌细胞的增殖能力(P＜0.05).在PIF1敲除的卵巢癌细胞中,Rad51表达减少.而在PIF1缺失的细胞中过表达Rad51蛋白后PIF1表达增加,γ-H2AX蛋白表达减少(P＜0.05),并且挽救细胞增殖(P＜0.01).免疫荧光显示,EGFP-PIF1和Rad51在细胞核内共定位.结论 PIF1和Rad51共同调控卵巢癌细胞的DNA损伤和细胞增殖.