摘要目的 探讨静息期精原前体细胞Rb1敲除致雄鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)特化异常的调控机制.方法 ①用R对在基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)(GEO登记号:GSE124904)获取的出生后0.5 d(postnatal day 0.5,P0.5)雄鼠精原前体细胞单细胞测序数据进行分析.②用Vasa-Cre工具鼠与Rb1flox/flox(或Id4-gfpTg;Rb1flox/flox)小鼠配繁构建静息期精原前体细胞Rb1条件性敲除(conditional knock out,cKO)雄鼠或带ID4绿色荧光(ID4-GFP)的Rb1 cKO雄鼠,通过PCR基因鉴定判断生殖细胞Rb1敲除情况以区分cKO雄鼠与对照(Con).采集出生后数天内的小鼠(n=3～8)睾丸,利用流式细胞术基于细胞荧光强度将ID4-GFP细胞均分为3个群落,检测各个群落细胞数量和细胞周期.③免疫荧光染色检测生殖细胞增殖(Ki67+)、SSCs特化(FOXO1胞核转换)和生殖细胞分化(STRA8+)情况.④TUNEL染色检测细胞凋亡.结果 ①单细胞测序数据分析显示:在P0.5精原前体细胞的2类细胞中,与细胞增殖相关的基因在将特化为精原干细胞的那一群细胞中富集表达.②生殖细胞增殖情况检测表明:P2.5时,对照[(11.22±3.27)%]与cKO小鼠[(46.10±6.21)%)]小鼠睾丸横切面生殖细胞Ki67+占比差异具有统计学意义(P<0.01).③流式细胞术分析表明:P2.5对照[(5.05±1.46)%]与cKO[(12.05±2.22)%]小鼠睾丸ID4-GFP荧光强度最强的那群细胞处于S期的占比差异具有统计学意义(P<0.05).④TUNEL染色显示cKO组而非对照组小鼠睾丸横切面检测到细胞发生凋亡.⑤SSCs特化标志检测结果显示对照[(20.57±2.15)%]和cKO[(45.08±2.45)%]小鼠睾丸横切面生殖细胞FOXO1位于细胞质的占比差异具有统计学意义(P<0.01).结论 静息期精原前体细胞Rb1敲除使其出生后细胞周期恢复紊乱、凋亡发生,导致SSCs特化异常.