摘要目的 探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)自身抗体(AT1R autoantibody,AT1-AA)通过促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)生物钟蛋白BMAL1异常表达诱导细胞表型转换以及血管纤维化的作用机制.方法 将12只6～8周的SD雄性大鼠(体质量180～220 g)按随机数字表法分为2组(n=6):对照组以及使用AT1R细胞外第二环(extracellular loop Ⅱ of angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R-ECLⅡ)主动免疫SD大鼠建立的AT1-AA阳性组.采用HE染色和Masson染色分别观察2组大鼠胸主动脉血管结构变化和纤维化情况(n=3).采用Western blot检测血管组织以及原代VSMCs中纤维化标志蛋白Collagen Ⅰ、表型转换相关蛋白SM22、α-SMA、OPN以及MMP2的表达(n=4),此外,还检测了CT0、CT4、CT8、CT12、CT16、CT20时生物钟蛋白BMAL1的表达.通过Transwell实验和划痕实验检测VSMCs的增殖迁移能力(n=3),使用si-RNA技术敲低Bmal1后检测BMAL1、Collagen Ⅰ、表型转换相关蛋白的表达(n=3).另外,构建AT1-AA阳性的AT1R敲除(AT1R-KO)大鼠模型使用Western blot检测其胸主动脉血管组织BMAL1的表达(n=4).结果 AT1-AA阳性大鼠胸主动脉血管壁增厚[(140±9)%vs(120±5)%,P<0.05],血管平滑肌细胞排列紊乱,Masson染色蓝染明显,且Collagen Ⅰ表达较Control组表达上调(P<0.05).AT1-AA阳性大鼠胸主动脉以及AT1-AA处理的VSMCs中收缩表型相关蛋白α-SMA、SM22表达下降(P<0.05),合成表型相关蛋白OPN、MMP2表达上调(P<0.05);AT1-AA诱导VSMCs划痕愈合能力以及迁移能力都显著增强.进一步发现,Bmal1的mRNA表达(0.67±0.26 vs 1.03±0.17)以及蛋白表达(0.46±0.06 vs 0.85±0.26)均在CT12时显著上调(P<0.05),且Bmal1的节律性消失(P<0.05).敲低BMAL1后,AT1-AA诱导的VSMCs表型转换现象得到部分改善.与AT1-AA阳性的WT大鼠比较,AT1-AA阳性的AT1R-KO大鼠胸主动脉血管中BMAL1 表达明显降低(1.35±0.06 vs 0.86±0.07,P<0.001);细胞水平发现AT1-AA诱导的VSMCs表型转换及胶原蛋白Collagen Ⅰ高表达的现象在AT1R-KO的VSMCs中得到部分改善.结论 AT1-AA通过AT1R-Bmal1轴促进VSMCs表型转换以及血管纤维化.