摘要目的 探究缺氧通过驱动M1型巨噬细胞极化,进而诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性细胞死亡(lysosome-dependent cell death,LDCD)在生精功能障碍中的关键作用.方法 将10只8周龄雄性SD大鼠(体质量220～250 g)按照完全随机设计,分为常氧组(n=5)与缺氧组(n=5),分别置于常氧饲养环境和模拟5 000 m海拔的低压低氧环境暴露4周以构建缺氧动物模型.采用1%O?低氧工作站处理TM3(小鼠睾丸间质细胞)2 d以构建缺氧细胞模型,并建立RAW 264.7巨噬细胞与TM3细胞的Transwell共培养体系.采用睾丸组织HE染色进行病理形态学分析并计算生精细胞数量/生精小管面积;通过ELISA方法(以BCA法标化)检测睾丸组织睾酮含量;利用免疫荧光染色定量睾丸组织间质细胞(CYP11A1+)数量和M1型巨噬细胞(CD68?/CD86?)与细胞玻片中M1型巨噬细胞(iNOS+)极化;应用公共数据库(PRJNA926018)的单细胞转录组测序(scRNA-seq)数据与基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)筛选间质细胞中的程序性死亡方式;借助LysoTracker探针与组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)免疫荧光染色评估TM3细胞溶酶体完整性及通透性.结果 在体实验发现缺氧状态显著降低大鼠睾丸生精小管中生精细胞数量(P<0.01)及睾酮含量(P<0.01),伴随间质细胞(CYP11A1+)数量减少(P<0.01).scRNA-seq揭示缺氧条件下长形精子细胞、间质细胞、支持细胞比例显著减少(P<0.01),然而精母细胞和精原细胞比例显著上调(P<0.01),并且间质细胞中LDCD通路显著富集(P=0.002 7).除此之外,缺氧环境可诱导M1型巨噬细胞浸润(CD68+/CD86+)睾丸,并且缺氧也能促进RAW 264.7细胞中iNOS+表达(P<0.01).体外Transwell共培养实验提示单独缺氧不影响TM3细胞溶酶体膜稳定性,而与缺氧处理的RAW 264.7细胞共培养加剧溶酶体通透性.结论 缺氧可能是通过驱动M1型巨噬细胞极化,进而诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性细胞死亡,最终导致睾酮合成减少与生精功能障碍.