福尔马林保存的动物标本基因组DNA的提取方法

A METHOD OF EXTRACTING GENOMIC DNA FROM ANIMAL SPECIMEN PRESERVED IN FORMALIN

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摘要从在福尔马林长期保存的动物物标本中提取基因组DNA用于分子生物学研究一直是一个未得到彻底解决的难题.本文提出了一种从浸泡在福尔马林的大仓鼠肝脏和日本鳗鲡肌肉标本中提取基因组DNA的新方法.取浸泡于福尔马林中的大仓鼠肝脏或日本鳗鲡肌肉适量,用PBS溶液冲洗,放在灭菌的吸水纸上将其揩干,于超净工作台内用无菌剪刀将材料剪成50 mg的小块,放入PBS液浸泡12～24 h;然后转入70%的乙醇中处理12～24 h.依次换入下列梯度酒精中处理:80%乙醇,2 h,重复一次;90%乙醇,2 h,重复一次;95%乙醇,2 h,重复一次;100%乙醇,1 h,重复一次.然后将材料放入1/2倍的PBS液中浸泡12 h,其间更换一次溶液.提取方法参考Sambroock等人(1989),加蛋白酶K的量按标准量(100 μg/mL),在50～56℃温浴3～6 h处理过程中,不断轻摇混匀,视消化效果可以重复加入标准量的1/2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止;酚氯仿抽提最后一次的上清液移入透析袋中透析;沉淀DNA时,在-20℃下20 min效果为宜.该方法主要特点在于对标本进行预处理,在保证不使DNA进一步降解的前提下,首先去除标本中所含的福尔马林溶液的成分,然后利用改进的酚氯仿抽提法提取该类标本的基因组DNA,再进一步用透析法纯化DNA.研究结果表明,采用该方法提取和纯化被试标本基因组DNA能较好地应用于RAPD、微卫星位点的PCR扩增、Southern和斑点杂交.