银鲫种系细胞标记分子Vasa: cDNA克隆及其抗体制备

Gibel carp germ cell marker Vasa: cDNA cloning and its antibody preparation

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摘要种系细胞始自胚胎发育早期, 是动物生殖及生殖工程的基础.为研究鱼类的种系细胞提供标记分子, 我们克隆并鉴定了银鲫的vasa cDNA 即Cagvasa.Cagvasa cDNA全长2 771 碱基(nt), 编码的蛋白为银鲫Vasa即CagVasa, 全长701 个氨基酸(aa).CagVasa蛋白与已知Vasa蛋白的结构特征一致:在N端有14个RGG重复序列, 在C端Vasa所特有的8个功能域俱全.银鲫Vasa与鲤鱼、斑马鱼、陆生脊椎动物和果蝇的Vasa蛋白分别有95%, 89%, 61%-66%和50%的同源性.卵巢切片的RNA原位杂交揭示, Cagvasa 限于种系细胞, 且表达水平呈现出低-高-低的动态变化:即两头低 (卵原细胞跟Ⅳ期成熟卵子), 中间高(Ⅱ-Ⅲ期卵子).为分析鱼类种系细胞提供手段, 我们用310-aa 的N端序列产生细菌的重组蛋白来免疫大白兔, 获得了抗Vasa的多克隆抗体αVasa.Western免疫印迹表明, αVasa特异性地识别一个鱼类性腺的蛋白,该蛋白的分子量为75 kD, 仅见于银鲫的性腺和卵子.卵巢切片的组织免疫荧光共聚焦显微分析表明, 抗体αVasa只对种系细胞染色:卵原细胞着色最深, 卵母细胞和早期的卵子都浓染, 成熟卵则浅染.类似情况亦见之于精子发生早期阶段的雄性种系细胞.卵巢和精巢的体细胞则不着色.因此, Cagvasa编码的当是Vasa同源蛋白, 为银鲫种系细胞的第一个标记分子.我们的研究表明, 抗体αVasa染色灵敏度高, 特异性好, 当是鉴别银鲫及其它鲤科鱼类的种系细胞的有效手段

作者徐红艳 ^[1] 彭金霞 ^[2] 桂建芳 ^[2] 洪云汉 ^[1] 学术成果认领

作者单位中国科学院水生生物研究所淡水生态学和生物技术学国家重点实验室,武汉,430072;新加坡国立大学生物科学系,肯特冈10号,新加坡,119260 ^[1] 中国科学院水生生物研究所淡水生态学和生物技术学国家重点实验室,武汉,430072 ^[2]

关键词银鲫种系细胞卵巢精巢 vasa Gibel carp Carassius auratus gibelio Germ cells Ovary Testis vasa

主题词细胞(Cells)银(Silver)抗体(Antibodies)蛋白(Egg White)卵巢(Ovary)

分类号 Q95

栏目名称 方法和观点

DOI 10.3969/j.issn.1674-5507.2005.04.025

发布时间 2005-09-15

基金项目

This work contains part of the Ph.D. thesis of XHY. This work was funded by the grants from Chinese Academy of Sciences 科技部资助项目 the Biomedical Research Council of Singapore the National University of Singapore