换一批
换一批摘要运用SMART技术构建了毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)大脑组织全长cDNA文库.提取大脑组织总RNA,Oligotex mRNA Kit纯化、获得poly(A)+RNA,以CDSⅢ/3'PCR引物进行逆转录,LD-PCR扩增获得全长双链cDNA,经SfiⅠ酶切及柱层析分离后,500bp以上的片段与载体λTripIEx2连接,体外包装得到cDNA文库.经鉴定原始文库滴度为5.1×105pfu/ml,扩增后文库滴度为1.5×109pfu/ml,重组率达到85%以上,插入片断平均长度约为1.0kb,说明构建文库质量符合要求,可用于大脑特异表达基因的筛选.从该文库中克隆到了rig基因全长,包含5'和3'非编码区,从第43至477个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框可编码一个145氨基酸的rig蛋白.
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分类号
Q953
栏目名称
珍稀濒危动物
DOI
10.3969/j.issn.0250-3263.2006.01.009
发布时间
2006-03-23
基金项目
中国科学院资助项目
江苏省教育厅自然科学基金
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