换一批
换一批猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析
Expression and Activity Analysis of Recombinant ORF2-ORF1 Protein of PCV-2
摘要为探讨原核表达的PCV-2 ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1.转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析.纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应.重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础.
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