换一批产肠毒素大肠埃希菌 K99菌毛基因的克隆与原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of Enterotoxigenic E.coli K99 Fimbria Gene
摘要本试验采用产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）K99菌毛基因完整编码框的特异性引物，以牛源大肠埃希菌 C83912基因组 DNA 为模板，扩增出大小为498 bp 的 ETEC K99菌毛基因完整编码框，克隆至pMD19-T 载体，阳性重组质粒 pMD19-T-K99经 PCR、双酶切鉴定和测序正确后，双酶切产物与 pET-32a （＋）载体连接，构建原核表达载体 pET-32a（＋）-K99，转化原核表达工程菌 BL21（DE3），阳性转化子经IPTG 诱导获高效表达，Western blot 证明原核表达的 K99重组蛋白能与 K99单因子血清发生特异性反应，重组蛋白免疫家兔后可产生特异性抗体，证明重组蛋白具有良好的抗原性。ETEC K99原核表达质粒的构建和表达产物抗原性研究，为进一步研究 K99亚单位疫苗以及制备 K99特异性抗体奠定了基础。
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关键词
产肠毒素大肠埃希菌K99 菌毛克隆原核表达抗原性Enterotoxigenic E.colifimbia K99cloningprokaryotic expressionantigenicity
分类号
S852.612
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2014.05.003
发布时间
2014-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
西南民族大学研究生创新项目（CX2013SZ75）
国家科技支撑计划（2012BAD13B06）
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