马疱疹病毒8型gD蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备

Bioinformatic Analysis and Polyclonal Antibody Preparation of Equine Herpesvirus Type 8 gD Protein

二维码有效期 120s

摘要旨在探索马疱疹病毒 8 型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白 gD 的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备.用生物信息学分析软件对 gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66 毒株为模板,通过PCR 扩增 gD蛋白的胞外区并克隆至 pET-32a(+)载体中,将重组质粒pET-32a-gD转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,收集菌体超声破碎,纯化并获得重组gD蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用间接 ELISA 测定所制备多克隆抗体的效价,同时用Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)明确所制备多克隆抗体的特异性.结果表明,EHV-8 gD编码的蛋白稳定,是亲水性蛋白,有跨膜区,位于 30-330 aa.gD蛋白跨膜区正确克隆入 pET-32a(+)载体,获得重组质粒pET-32a-gD.重组gD蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,分子质量约为 55 ku,将其纯化后免疫新西兰兔获得抗gD多克隆抗体,该抗体的效价高达 1∶200 000,Western blot与 IFA结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性.