小反刍兽疫病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立

Establishment of a Competitive ELISA for Antibody Detection of PPRV

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摘要为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表达、稳定分泌和具有较好竞争效果的抗PPRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1G2).以纯化的PPRV N蛋白为包被抗原,HRP标记的1G2单克隆抗体(1G2-HRP)作为竞争抗体,建立了小反刍兽疫病毒竞争ELISA(competitive ELISA,cELISA)抗体检测方法.经优化反应条件确定最佳抗原包被浓度为1.0 μg/mL,待检血清最佳稀释条件为4倍稀释,1G2-HRP酶标抗体最佳工作浓度为250 ng/mL;当阻断率(PI值)小于42％,判定为抗体阴性;阻断率大于或等于42％,判定为抗体阳性.该方法最低可检测128倍稀释的PPRV抗体阳性血清,具有较高的敏感性;仅能检测PPRV抗体,与羊源常见病原和pET-30a-BL21(DE3)的抗体阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间变异系数均小于15％,具有良好的重复性.该方法与血清中和试验的阳性符合率为87.80％(95％CI:73.80,95.92),阴性符合率为 94.95％(95％CI:88.61,98.34),总符合率为 92.86％(95％CI:84.11,97.64),Kappa值为0.83(95％CI:53.10,112.50),具有较高的符合率.表明建立的ELISA方法在我国PPRV的流行病学调查、疫苗免疫效果评估方面具有良好的应用前景.