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PRRSV、CSFV、PRV和PCV2四重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

Establishment and Application of PRRSV,CSFV,PRV,PCV2 Quadruplex Fluorescence Real-time PCR Detection Method

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摘要为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CS-FV的5'UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Man探针,并进行反应体系优化,敏感性、特异性验证,建立了同时检测上述4种病原的四重实时荧光定量PCR.结果显示,所建立的四重荧光PCR扩增效率(E)、相关系数(R2)及曲线斜率均在正常范围内,检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 E值、R2、斜率分别为 92.9％、0.998、-3.504,90.7％、0.998、-3.566,94.3％、0.996、-3.466,94.2％、0.997 及-3.470.PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 重组质粒最低检出限分别达到 102、102、102、103 copies/μL;四重qPCR反应体系中的多条引物间不发生交叉反应,经评价该方法特异性良好;批内和批间重复性试验结果显示,变异系数(CV)均在1％以下,具有良好的重复性.分别使用该方法和相应的国标荧光定量检测法对采集的298份临床样品进行检测对比,两种方法检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2阳性符合率分别为96.08％、96.38％、100％、94.95％,均在94％以上.结果表明,建立的检测方法方便、灵敏、高效、特异性强,适用于猪呼吸道疾病病原学、流行病学研究以及临床病例的诊断,并为猪呼吸道疾病的预防和控制提供技术支撑.

作者李欣 ^[1] 杨莉 ^[2] 刘光亮 ^[3] 王文秀 ^[4] 刘海隆 ^[5] 曹宗喜 ^[6] 张艳 ^[3] 学术成果认领

作者单位新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052;海南省农业科学院畜牧兽医研究所,海南海口 571100 ^[1] 新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052 ^[2] 海南省农业科学院畜牧兽医研究所,海南海口 571100;海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室,海南海口 571100 ^[3] 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州 256600 ^[4] 海南省农业科学院畜牧兽医研究所,海南海口 571100 ^[5] 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室,海南海口 571100 ^[6]

关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪圆环病毒2型四重实时荧光定量PCR PRRSV CSFV PRV PCV2 quadruplex real-time fluorescence PCR

分类号 S854.43 S858.28

栏目名称

研究论文

DOI 10.3969/j.issn.1007-5038.2024.06.002

发布时间 2024-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

海南省属科研院所技术创新专项项目（KYYS-2021-29）；海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室开放课题项目（HAAS2022PT0102）；中央引导地方科技发展专项项目（ZY2022HN09）