换一批H3、N2和N8亚型禽流感病毒三重RT-LAMP检测方法的建立与应用
Establishment and Application of a Triplex RT-LAMP Method for Detecting H3,N2 and N8 Subtypes of Avian Influenza Viruses
摘要为快速鉴别检测H3、N2和N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV),建立了一种可同时检测 H3、N2、N8 亚型 AIV的三重 RT-LAMP(triplex reverse transcript loop-mediated isothermal ampli-fication,tRT-LAMP)方法.根据 NCBI中H3、N2和 N8亚型 AIV的NA 基因保守序列分别设计3套LAMP引物,同时还设计了与FIP的F1c反向互补的荧光探针(FD),并通过退火的方式将FD结合到标记淬灭基团的FIP(FIP*)上,形成FIP*-FD复合探针后的荧光被淬灭,当FD与FIP*分离后,可检测到荧光信号.通过优化反应温度、特异性、敏感性、干扰性和临床样品检测等成功建立了同时检测H3、N2、N8亚型AIV的tRT-LAMP方法.该方法只需要67℃恒温条件就能准确检测和鉴别AIV的3种不同 目的基因,且检测其他相关的禽类病原时不产生非特异性扩增;每反应管检测H3、N2和N8亚型AIV最低限度分别为756、735、790 copies/μL,不同浓度模板之间互不干扰;临床样品检测结果显示,tRT-LAMP结果与RT-qPCR及测序结果完全一致.结果表明该方法具有快速、经济、灵敏和特异的优点,扩增结果还可直接肉眼观察,可应用于临床同时检测H3、N2和N8亚型禽流感病毒.
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分类号
S852.659.5
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2025.02.001
发布时间
2025-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广西重点研发计划项目（AB21076004）
广西自然科学基金项目（2022GXNSFAA035445）
广西自然科学基金项目（2021GXNSFBA196031）
广西八桂学者专项（2019-A50）
广西基本科研业务费桂科专项（24-8）
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