猪轮状病毒VP8截短蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备与免疫原性分析
Preparation and Immunogenicity Analysis of VP8 Truncated Protein-Ferritin Nanoparticles of Porcine Rotavirus
摘要在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性.将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8*-Ferritin,通过透射电镜(TEM)、高效液相色谱(HPLC)、动态光散射(DLS)对纳米颗粒进行表征分析,并配伍佐剂制备亚单位疫苗免疫小鼠.对免疫后各时间点小鼠血清的特异性IgG抗体和35 d的特异性IgG抗体进行分型(IgG2a和IgG1)检测.结果显示,VP8*-Ferritin能较好地在体外组装形成平均粒径为15.56 nm的颗粒结构,组装效率可达85%.免疫后14 d VP8*-Ferritin免疫组和VP8*免疫组均能在小鼠血清中检测到特异性IgG抗体,OD45.值分别为0.521和0.229;免疫后42 d各免疫组的特异性IgG抗体水平达到峰值,OD450值分别为1.197和0.531.免疫后的VP8*-Ferritin亚单位疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,其特异性IgG抗体水平极显著高于VP8*亚单位疫苗(P<0.01);VP8*-Ferritin免疫组IgG2a/IgG1比值为2.564,显著高于VP8*免疫组的IgG2a/IgG1比值1.791(P<0.05).结果表明VP8*-Ferritin纳米颗粒亚单位疫苗增强了 VP8*抗原的免疫原性,主要表现TH1型免疫反应,该结果为猪轮状病毒亚单位疫苗的研究提供了新思路.
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