换一批马疱疹病毒1型的RPA-CRISPR/Cas12a快速检测方法的建立
Establishment of RPA-CRISPR/Cas12a Rapid Detection Method for Equine Herpesvirus Type 1
摘要马疱疹病毒1型(EHV-1)可引起马属动物的马鼻肺炎,临床特征主要表现为孕马流产,还会引起新生马驹呼吸道感染甚至死亡,对马产业造成很大危害.以重组酶聚合酶扩增(RPA)、CRISPR/Cas12a反式酶切反应为基础,旨在建立EHV-1的RPA-CRISPR/Cas12a快速检测方法.试验过程中通过对EHV-1-ORF68基因进行相似性与遗传进化分析,并根据其保守序列设计RPA引物与crRNA,建立EHV-1的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法并进行特异性试验、敏感性试验以及临床样本检测.结果表明,建立的EHV-1的RPA-CRISPR/Cas12a方法可以特异性地检出EHV-1,对其他马相关病原进行检测均为阴性;最低检测限度为1.92 × 102 copies/μL,为传统PCR方法灵敏度(1.92× 104 copies/μL)的100倍;检测时间短,总时长约为35 min;应用建立的方法对24份临床阳性样本进行检测,结果阳性检出率为66.7％,高于传统PCR方法的29.2％.所建立的EHV-1 RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有良好的特异性与敏感性,结果准确,可以作为快速检测EHV-1的有效方法.
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关键词
马疱疹病毒1型重组酶聚合酶扩增CRISPR/Cas12a系统快速检测Equine herpesvirus type 1Recombinase polymerase amplificationCRISPR/Cas12a systemRapid detection
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2025.07.003
发布时间
2025-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
新疆维吾尔自治区天山英才-三农骨干人才培养项目（2022SNGGGCC021）
新疆维吾尔自治区重大科技专项子课题（2022A02013-2-5）
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