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伪狂犬病病毒gB蛋白在水稻细胞中的表达与纯化条件筛选

PRV-gB Protein Expression in Rice Cells and Screening of Its Purification Conditions

摘要为获得水稻细胞表达的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成gB基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-gB,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-gB转入水稻愈伤组织.经过暗培养和潮霉素B筛选和PCR鉴定阳性愈伤;阳性愈伤研磨后无糖诱导培养,Western blot鉴定表达gB蛋白;最后用Q Bestarose HP阴离子和GE Butyl 4FF疏水层析纯化gB蛋白.结果显示,经潮霉素筛选获得85个新愈伤,经PCR检测有63个阳性愈伤,Western blot检测其中有10个水稻细胞株表达gB蛋白,gB蛋白经Q Bestarose HP和GE Butyl 4FF纯化后,其纯度达60%左右.结果对制备猪伪狂犬病亚单位疫苗具有重要意义.

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