豆状囊尾蚴Stefin抗原单克隆抗体的制备及鉴定
Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies Against the Cysteine Protease Inhibitor Stefin of Taenia pisiformis in Rabbits
摘要为制备兔豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂Stefin抗原单克隆抗体,建立兔豆状囊尾蚴病新型血清学诊断方法,将纯化的Cpstefin重组蛋白背部多点注射Balb/c小鼠,经过3次常规免疫及1次冲击免疫,将制备的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤细胞进行筛选,筛选的阳性杂交瘤细胞经过3次亚克隆后,鉴定其重链和轻链亚类,并用Western blot对制备的单克隆抗体与豆状囊尾蚴粗抗原的反应特异性进行鉴定.最终成功筛选出4株阳性单克隆细胞杂交株,分别将其命名为2G9、1B3、1C9、1D5,其腹水效价均达到1∶64 000.4株单克隆抗体重链均为IgM类,轻链均为亚型为Kappa型,经 Western blot验证其与豆状囊尾蚴粗抗原反应特异性良好.研究结果为后续豆状囊尾蚴病特异性诊断技术研究提供试验材料.
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