换一批猪肉中常见的人畜共患细菌和寄生虫多重荧光PCR检测方法的建立与初步应用
Application of a Multiplex Real-time PCR Method for the Detection of Common Zoonotic Bacteria and Parasites in Pork
摘要为了建立快速、敏感、可同时检测猪肉中多种病原的多重荧光定量PCR,本研究针对猪肉中13种重要病原的特异基因保守序列,分别设计了引物及不同荧光基团标记的Taq Man探针,构建了含有目的基因的重组质粒,并用其进行反应体系优化,以及敏感性、特异性和重复性验证.结果显示,建立的3组三重与1组四重荧光定量PCR法能够在同一反应条件下2 h内完成对13种病原的特异性检测,反应体系中的多条引物探针间不发生交叉反应;最低检出限:致病性大肠埃希氏菌、沙门氏菌均为1拷贝/μL,单增李斯特菌为10拷贝/μL,结肠弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌均为102拷贝/μL,住肉孢子虫、猪丹毒杆菌、弓形虫、囊尾蚴、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌均为103拷贝/μL;重复性试验变异系数均在2.33％以下.多重荧光PCR和普通PCR法对30份猪肉样品的病原总体检出率分别为83％(25/30)和56.7％(17/30),二者总体符合率达到66.7％～100％.猪肉中常见13种病原的三重/四重荧光定量PCR检测方法的成功建立,为猪肉病原学检测和流行病学调查提供技术支撑,有助于保障猪肉食品安全.
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DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2026.04.008
发布时间
2026-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位项目（SDAIT-08-07）
国家重点研发计划（2024YFC2310305）
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