换一批羊源副结核分支杆菌2281c蛋白表达与多克隆抗体制备
Expression and Purification of 2281c Protein and Preparation of Polyclonal Antibody from Sheep-derived Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis
摘要为制备副结核分支杆菌2281c蛋白和抗MAP 2281c蛋白的多克隆抗体,本研究通过在线生物信息学软件对2281c蛋白进行理化性质、抗原决定簇、蛋白结构域、信号肽以及二级结构分析后,以实验室保存的羊源副结核分支杆菌NM5菌株基因组为模板扩增2281c基因657 bp片段,插入原核表达载体pET28a(+)后转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后用Ni-NTA resin亲和柱纯化重组蛋白pET28a-2281c,Western blot鉴定后三次免疫试验兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清抗体效价.SDS-PAGE结果显示获得了 21.6 ku的MAP 2281c重组蛋白,且主要以可溶性形式表达;Western blot分析显示MAP 2281c重组蛋白具有较好的抗原性,免疫兔血清中抗MAP 2281c蛋白多克隆抗体的效价为1∶200 000.结果表明成功制备出MAP 2281c蛋白的多抗,为后续建立羊副结核病的诊断方法奠定了基础.
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关键词
副结核分支杆菌2281c基因原核表达多克隆抗体Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis2281c geneProkaryotic expressionPolyclonal antibody
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2026.04.010
发布时间
2026-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
内蒙古自治区自然科学基金项目（2022MS03023）
鄂尔多斯市重点研发计划项目（YF20240007）
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