血清4型禽腺病毒Fiber蛋白抗原表位串联表达及其在抗体检测中的应用
Tandem Expression of Antigenic Epitopes of Fiber Proteins of Fowl Adenovirus Type 4 and Its Application in Antibody Detection
摘要旨在探索利用大肠埃希氏菌表达系统串联表达血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1和Fiber-2蛋白的多个抗原表位多肽,以表达的重组蛋白作为包被抗原,建立一种敏感性高、特异性好的FAdV-4抗体ELISA检测方法.应用生物信息学和免疫信息学软件预测和筛选FAdV-4 Fiber-1和Fiber-2蛋白的抗原表位各5个,人工合成以上10个抗原表位的串联多肽序列(命名为F1/2),应用大肠埃希氏菌表达系统表达并获得F1/2重组蛋白.以纯化的F1/2重组蛋白作为包被抗原,建立了一种FAdV-4抗体间接ELISA检测方法.性能测定结果显示建立的ELISA方法可特异性检出FAdV-4抗体,与NDV、ARV等8种病原的阳性血清无交叉反应;对FAdV-4阳性血清的检测下限为1∶12 800倍稀释;批内和批间重复性检测结果变异系数均低于5%.该方法在FAdV-4感染SPF鸡以后3 d即可从血清中检出抗体;对25个鸡场的509份临床血清样品的检测结果表明,送检鸡场的场阳性率为96%,样品总阳性率为88.61%.本研究成功建立了FAdV-4抗体的间接ELISA检测方法,该方法可为FAdV-4的早期诊断和抗体监测提供工具与支持.
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