换一批猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株荧光定量RT-PCR检测方法的建立
Establishment of a Fluorescence Quantitative RT-PCR Detection Method for Variant Strains of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
摘要为了对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)变异毒株做出快速检测,建立针对PRRSV不同变异毒株的荧光定量PCR检测方法.收集PRRSV阳性血清样本,柱提法提取病毒核酸,并进行反转录及PCR扩增,将PCR产物进行纯化、测序、比对、分析其基因型,以获取核酸阳性标准品,针对不同基因型建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行验证.结果显示,建立的检测方法特异性强,检测非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;以CT值为纵坐标,阳性标准品稀释浓度为横坐标绘制标准曲线,几乎检测所有变异株的标准曲线相关系数都符合标准曲线要求(R2≥0.99,斜率为-3.10～-3.60),扩增效率为90％～110％,该方法具有较高的灵敏性,组内和组间重复试验变异系数在5％以内.总之,建立的PRRSV变异毒株检测方法能区分高致病性、美洲型、经典型、NADC30样、NADC34样及通用型PRRSV,为PRRSV快速检测提供了技术支撑.
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关键词
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒荧光定量PCR特异性灵敏性重复性变异毒株Porcine reproductive and respiratory syndrome virusFluorescence PCRSpecificitySensitivityRepeatabilityVariant strain
分类号
S852.651
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2026.06.008
发布时间
2026-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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