换一批猪骨骼肌肌内脂滴分离和纯化方法的探究
Isolation and Purification of Intramuscular Lipid Droplets in Porcine Skeletal Muscle
摘要本试验旨在探究分离和纯化猪骨骼肌肌内脂滴的方法, 为深入揭示肌内脂肪形成的调控机制奠定基础.试验采集体重为 (120±2) kg的"杜×长×大"三元杂交猪的背最长肌, 采用梯度超速离心法对猪背最长肌肌内脂滴初步超速分离, 探索不同组织匀浆方式、缓冲液pH、温度及苯甲基磺酰氟 (PMSF) 对肌内脂滴初分离的影响, 确定高效获取纯化脂滴的最佳离心力及离心时间.使用油红O及Bodipy染色进行肌内脂滴形态学鉴定, 通过考马斯亮蓝染色及Western blot技术对脂滴进行纯度检测.结果表明:使用全自动组织研磨仪匀浆猪骨骼肌, 在4℃、pH 7.4缓冲液中添加PM SF时分离获得的肌内脂滴形态完整;纯化条件为4℃、230 000×g离心30 min时获得脂滴量最多、形态最好, 考马斯亮蓝染色鉴定脂滴蛋白条带丰富清晰, 并且Western blot验证纯度最高.本实验室建立了猪骨骼肌肌内脂滴的分离和纯化方法, 应用此方法获得了形态完整且纯度较高的肌内脂滴, 该技术可为研究肌内脂肪生成和分子调控机制开辟新的途径.
更多相关知识
关键词
猪骨骼肌肌内脂滴超速离心分离纯化porcineskeletal muscleintramuscular lipid dropletsultracentrifugationisolation and purification
分类号
S811.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-267x.2019.01.033
发布时间
2019-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览8
- 被引4
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
