摘要本研究以体外培养奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为模型,探究添加不同水平丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)及其组合对α-酪蛋白合成的影响.采用3因素×7水平随机试验设计,体外培养MAC-T采用含10％胎牛血清的培养基培养贴壁后,换无血清培养基饥饿培养18 h,然后以无血清培养基细胞为空白对照(CK),试验处理分别添加不同水平Ala(0.37、0.74、1.48、2.95、5.90、11.78 mmol/L)、Glu(0.77、1.53、3.06、6.13、12.25、24.50 mmol/L)和 Pro(0.52、1.04、2.09、4.17、8.35、16.69 mmol/L).采用 Box-Behnken 法建立模型,并运用 Design-Expert 10.0.3软件进行数据分析,得到使α-酪蛋白合成量最高的Ala、Glu、Pro适宜配比组合.采用CCK8法检测MAC-T增殖率,并采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测α-酪蛋白合成量,同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测合成α-酪蛋白相关基因的相对表达量.结果表明:1)与CK相比,在4、6、12、24、48 h时,单一添加Ala、Glu、Pro均极显著提高MAC-T增殖率(P＜0.01).2)与CK相比,除3.06 mmol/L Glu和0.52 mmol/L Pro外,单一添加不同水平Ala、Glu、Pro均极显著提高体外培养24 h细胞内和细胞外(上清)α-酪蛋白合成量(P＜0.01).3)单一添加Ala、Glu、Pro时,对α-酪蛋白合成量影响的重要程度为Glu＞Ala＞Pro,3种氨基酸的适宜组合为 6.80 mmol/L Ala、22.20 mmol/L Glu、8.30 mmol/L Pro.4)与 CK 相比,组合添加Ala、Glu、Pro显著提高MAC-T增殖率(P＜0.01),且在24 h时MAC-T增殖率达到最高;组合添加Ala、Glu、Pro显著提高细胞内和细胞外α-酪蛋白合成量(P＜0.01).5)与CK相比,单一添加Ala、Glu、Pro及组合添加3种氨基酸均极显著提高α-酪蛋白合成相关基因αS1-酪蛋白(CSN1S1)和αS2-酪蛋白(CSN1S2)相对表达量(P＜0.01).综上所述,组合添加6.80 mmol/L Ala、22.20 mmol/L Glu、8.30 mmol/L Pro,对 MAC-T 合成 α-酪蛋白促进效果最佳.