摘要本试验通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,旨在探讨中国杨属型蜂胶乙醇提取物(EECP)对巨噬细胞能量代谢及抗炎活性的影响.试验设正常组、LPS 组(1.00 μg/mL)、低浓度 EECP 组(1.00 μg/mL LPS+5.00 μg/mL EECP)、高浓度EECP组(1.00 μg/mL LPS+10.00 μg/mL EECP),每组至少3次重复.试验检测一氧化氮(NO)的生成、活性氧(ROS)含量和线粒体膜电位.通过实时荧光定量PCR分析炎症相关基因、抗氧化相关基因、糖代谢相关基因和M1/M2型巨噬细胞标志物相关基因的表达.通过蛋白免疫印迹分析Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路、糖代谢相关蛋白表达水平.结果表明:1)EECP中总黄酮含量为(265.88±3.98)mg芦丁当量/g,总酚酸含量为(278.57±2.69)mg没食子酸当量/g.2)与LPS组相比,低、高浓度EECP均极显著抑制了细胞NO的生成(P＜0.001),且分别显著和极显著降低了细胞中ROS含量(P＜0.05和P＜0.001),并分别显著和极显著逆转了线粒体膜电位水平下降(P＜0.05和P＜0.001).3)实时荧光定量PCR结果显示,与LPS组相比,高浓度EECP显著下调了促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和环氧合酶-2(Cox-2)的基因相对表达量(P＜0.05),并极显著下调了白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(Mcp-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的基因相对表达量(P＜0.01或P＜0.001).此外,低、高浓度EECP均极显著上调了抗氧化相关基因血红素氧合酶-1(HO-1)的相对表达量(P＜0.01和P＜0.001),且高浓度EECP分别显著和极显著上调了核因子E2相关因子2(Nrf2)和硫氧还蛋白还原酶(TXNRD)的基因相对表达量(P＜0.05和P＜0.001).4)与LPS组相比,低、高浓度EECP均显著抑制了核因子κB抑制蛋白α(IKBα)的活化(P＜0.05),而高浓度EECP极显著抑制了TLR4基因相对表达量和蛋白表达水平(P＜0.01).此外,低浓度EECP极显著抑制了 NF-κB p65蛋白的活化(P＜0.001).5)与LPS组相比,高浓度EECP显著抑制了己糖激酶2(HK2)和葡萄糖转运体3(GLUT3)的基因相对表达量(P＜0.05),并极显著下调了葡萄糖转运体1(GLUT1)的基因相对表达量(P＜0.001).在蛋白水平上,与LPS组相比,高浓度EECP显著抑制了 HK2和乳酸脱氢酶A(LDHA)的蛋白表达水平(P＜0.05),并极显著降低了 GLUT3和丙酮酸激酶M2型(PKM2)的蛋白表达水平(P＜0.01).6)与LPS组相比,高浓度EECP显著降低了 M1型巨噬细胞标志物分化簇86(CD86)的基因相对表达量(P＜0.05),并分别显著和极显著上调了 M2型标志物转化生长因子-β(TGF-β,P＜0.05)和分化簇206(CD206,P＜0.01)基因相对表达量.综上所述,EECP富含多酚类物质,通过降低能量代谢和抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路,在LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中具有抗炎和抗氧化活性,从而抑制促炎极化.