酵母硒对农药敌草快诱导的鸡小肠细胞自噬及PTEN诱导假定激酶1和帕金蛋白表达的影响
Effects of Yeast Selenium on Autophagy and Expression of PTEN-Induced Putative Kinase 1 and Parkin in Chicken Small Intestinal Cells Induced by Pesticide Diquat
摘要本试验旨在探究酵母硒(SeY)对敌草快诱导的鸡小肠细胞自噬的影响.将120只180日龄康乐黄公鸡随机分成4组,每组3个重复,每个重复10只公鸡.4组公鸡经适应性饲养1周后进行不同处理:CON组为对照组,饲喂基础饲粮,第14天腹腔注射0.9%生理盐水;DQ组为敌草快诱导氧化应激组,饲喂基础饲粮,第14天腹腔注射敌草快(15 mg/kg BW,溶于0.9%生理盐水);SeY+DQ组为SeY预处理+敌草快诱导氧化应激组,饲喂在基础饲粮中添加0.5 mg/kg SeY的试验饲粮,第14天腹腔注射敌草快(15 mg/kg BW,溶于0.9%生理盐水);SeY组为SeY预处理组,饲喂在基础饲粮中添加0.5 mg/kg SeY的试验饲粮,第14天腹腔注射0.9%生理盐水.试验期为18 d,试验结束后将试鸡全部处死,取小肠组织,分别采用免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR法分析不同组别鸡十二指肠、空肠和回肠中微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)和帕金蛋白(Parkin)的蛋白定位以及蛋白与基因的表达情况.结果显示:1)LC3B、PINK1和Parkin蛋白主要分布在各肠段的小肠绒毛黏膜上皮、小肠腺上皮和十二指肠腺上皮细胞胞质中.2)DQ组十二指肠和空肠中LC3B蛋白相对表达量显著高于CON组和SeY+DQ组(P<0.05);与CON组相比,DQ组回肠中LC3B蛋白的相对表达量显著降低(P<0.05),而PINK1蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05).PINK1蛋白的相对表达量在十二指肠和空肠均表现为SeY组显著高于CON组(P<0.05),SeY+DQ组显著高于DQ组(P<0.05).在十二指肠中,Parkin蛋白的相对表达量在DQ组和SeY组显著低于CON组(P<0.05).在空肠中,与CON组相比,Parkin蛋白的相对表达量在DQ组显著升高(P<0.05),而在SeY组显著降低(P<0.05).3)DQ组十二指肠中LC3B和PINK1基因的mRNA相对表达量显著高于CON组(P<0.05);SeY+DQ组十二指肠中LC3B、PINK1和Par-kin基因的mRNA相对表达量均显著高于DQ组(P<0.05);CON组和SeY+DQ组空肠中LC3B和PINK1基因的mRNA相对表达量显著高于DQ组(P<0.05),而Parkin基因的mRNA相对表达量则显著低于DQ组(P<0.05);DQ组回肠中LC3B、PINK1和Parkin基因的mRNA相对表达量均显著高于CON组和SeY+DQ组(P<0.05).以上研究结果表明,敌草快处理能够诱导鸡十二指肠和空肠细胞自噬水平增加,饲喂SeY后细胞自噬水平下降,这可能与线粒体自噬PINK1/Parkin通路有一定关联.
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