摘要本研究采用网络药理学、分子对接和分子动力学模拟技术探究橙皮苷缓解断奶仔猪肠道黏膜损伤的作用机制.通过 TCMSP、Pharm Mapper 和 Swiss Target Prediction 数据库筛选橙皮苷作用靶点,并与 GeneCards、OMIM 和 DrugBank 等数据库获取的断奶仔猪肠道黏膜损伤靶点取交集,获得共同作用靶点集.构建蛋白质-蛋白质互作网络并筛选核心靶点,利用 DAVID 数据库对交集靶点进行 GO 功能和 KEGG 通路富集分析.采用 AutoDock Tools 和 GROMACS 软件进行分子对接和分子动力学模拟,解析橙皮苷与核心靶点的结合模式与动态构象.基于过氧化氢(H2O2)诱导的 IPEC-J2 细胞氧化应激模型,结合 CCK-8 和实时荧光定量 PCR 法验证橙皮苷的药效及机制.结果表明:橙皮苷缓解断奶仔猪肠道黏膜损伤的交集靶点有 46 个,其中核心靶点 6 个,分别是表皮生长因子受体(EGFR)、纤维连接蛋白 1(FN1)、B 淋巴细胞瘤 2(BCL2)、前列腺素内过氧化物合酶 2(PTGS2)、胱天蛋白酶 3(CASP3)和雌激素受体 1(ESR1).GO 功能和 KEGG 富集分析表明,这些靶点与糖尿病并发症晚期糖基化产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路、癌症通路、内分泌抵抗、细胞凋亡和肿瘤坏死因子信号通路等相关.分子对接结果显示,橙皮苷通过氢键、范德华力及碳氢键等分子间作用力与核心靶蛋白稳定结合;分子动力学模拟进一步验证了橙皮苷与 BCL2 和 EGFR 形成稳定的动态结合构象.细胞试验结果表明,与氧化应激组相比,400 μmol/L 橙皮苷能显著上调 IPEC-J2 细胞 BCL2、EGFR 和 FN1 的 mRNA相对表达水平(P＜0.05),并显著下调 PTGS2 的 mRNA 相对表达水平(P＜0.05),显著提高细胞活力(P＜0.05).综上所述,橙皮苷可能通过协同调控细胞凋亡、增殖及炎症反应等多靶点网络缓解断奶仔猪肠道黏膜损伤,这为其作为绿色饲料添加剂的开发应用提供了理论依据.