特异性核酶对宫颈癌细胞系CaSKi增殖与凋亡的影响

Effects of anti-HPV16 E6-ribozyme on the proliferation and apoptosis of human cervical cancer cell line CaSKi

二维码有效期 120s

摘要目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响.方法设计特异性切割HPV16E6基因的核酶,构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒.以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导人CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞.点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern blotting检测CaSKi、CaSKi-R、CaSKi-P 3种细胞中E6基因的表达.测定3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,并以皮下接种法检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力.流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、P53、fas、PCNA、C-erbB-2等基因的表达.结果点杂交证实该核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern blotting证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低.与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的致癌能力下降,凋亡率明显增高,出现凋亡峰,S期、G2M期细胞百分率下降;而CaSKi-P细胞无此改变.CaSKi-R细胞表达HPV16E6、C-myc、BcI-2、PCNA、C-erbB-2蛋白明显减少,而p53表达明显增高;CaSKi和CaSKi-R细胞中Fas蛋白的表达相近.CaSKi-P细胞中各基因的表达与CaSKi细胞无显著差异.结论抗HPV16E6核酶的导入能阻碍宫颈癌细胞增殖,诱导其凋亡,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低,以及由此而引起的细胞内一系列基因表达的改变.