换一批携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定
Sorting of packaging cells for retroviral vector carrying green fluorescent gene and viral titer determination
摘要目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法.方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定.结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞.PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段.滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度.结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法.
更多相关知识
分类号
R456（治疗学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1673-4254.2005.01.007
发布时间
2005-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国科学院项目（非规范项目）（30400163）
中国科学院项目（非规范项目）（30371252）
- 浏览265
- 被引6
- 下载4
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
