换一批
换一批慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立
Establishment of a nasopharyngeal carcinoma cell line with stable nestin silencing by lentivirus-mediated RNA interference
摘要目的 检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株.构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株.方法 应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平.构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定.293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度.经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点.将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达.结果 在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高.PCR和测序验证重组质粒构建成功.慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制.结论 成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株.
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分类号
R730.2
栏目名称
基础研究
DOI
10.12122/j.issn.1673-4254.2011.04.008
发布时间
2011-08-02
基金项目
国家自然科学基金委与广东省政府联合重点基金
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