换一批
换一批靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定
Selection and identification of specific-binding peptides for cancer stem cell surface marker CD133
摘要目的 筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定.方法 首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽.应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆.提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列.通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况.结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍.经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义.经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强.结论 成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行.
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主题词
肿瘤干细胞(Neoplastic Stem Cells)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)肽库(Peptide Library)细菌噬菌体(Bacteriophages)人(Persons)
分类号
R34
栏目名称
基础研究
DOI
10.12122/j.issn.1673-4254.2011.05.005
发布时间
2011-07-21
基金项目
国家自然科学基金
广东省科技计划项目
广东省自然科学基金
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