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哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建

Construction of rheumatoid arthritis-specific full-length fully human mammalian display antibody libraries

二维码有效期 120s

摘要目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库.方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO- 10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达.结果　成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgGl -Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80％和60％,可表达的抗体库多样性为6.13×1010.结论　类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础.

作者周烨 ^[1] 陈振瑞 ^[2] 贺微 ^[3] 娄海波 ^[2] 张哲欢 ^[2] 刘叔文 ^[3] 姜世勃 ^[4] 吴曙光 ^[3] 李长征 ^[5] 周辰 ^[6] 学术成果认领

作者单位南方医科大学基因工程研究所,广东广州,510515 ^[1] 南方医科大学南方医院,广东广州,510515 ^[2] 南方医科大学药学院,广东广州,510515 ^[3] 复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室,上海,200032 ^[4] 南方医科大学中医药学院,广东广州,510515 ^[5] 南方医科大学药学院,广东广州510515;香港Dgen生物技术有限公司,香港999077 ^[6]

关键词哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪

医学主题词抗体(Antibodies)细胞(Cells)关节炎, 类风湿(Arthritis, Rheumatoid)哺乳动物(Mammals)数据库, 核酸(Databases, Nucleic Acid)

分类号 R684（骨科学《运动系疾病、矫形外科学》）

栏目名称

基础研究

DOI 10.12122/j.issn.1673-4254.2011.08.020

发布时间 2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）