换一批
换一批黄粉虫抗菌肽Tenecin基因的克隆、原核表达及其抑菌活性
Cloning, prokaryotic expression and antifungal assay of Tenecin gene encoding an antibacterial peptide from Tenebrio molitor
摘要目的 为研究黄粉虫体内抗菌肽表达调控的分子机制,克隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并研究其原核表达产物的抑菌活性.方法 用大肠杆菌DH-5α菌液(1×108/ml)腹部注射黄粉虫5龄幼虫,72 h后提取其总RNA,RT-PCR克隆Tenecin 基因,测序并进行生物信息学分析；构建原核表达重组载体pET-28a(+)-Tenecin并转入大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导观察其表达情况；将4种不同浓度的原核表达产物Tenecin蛋白作用于大肠杆菌DH-5α,测量抑菌圈直径大小,观察其抑菌作用.结果 电泳及测序结果显示:Tenecin基因的大小为255 bp左右；用1 mmol/L IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳检测在9 000附近有目的条带,与理论值大小相符；体外抑菌试验表明:试验设3个重复,浓度为80、60、40、20 μg/ml的Tenecin 蛋白与大肠杆菌DH-5α共培养18h后,抑菌圈直径(mm)分别为25.1±0.03、20.7±0.06、17.2±0.11、9.3±0.04.结论 成功克隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并成功表达Tenecin蛋白,该蛋白对大肠杆菌DH-5α有明显抑制作用,为后期临床应用奠定基础.
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分类号
R372
栏目名称
基础研究
DOI
44-1627/R.20111205.1414.003
发布时间
2012-03-20
基金项目
国家自然科学基金
安徽省自然科学基金
皖南医学院中青年科研基金
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