抗钠泵α2亚单位截断性片段多肽抗体的制备与鉴定

Preparation and characterization of polyclonal antibodies against rat sodium pump alpha 2 subunit M1-M2 extra membrane fragment

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摘要目的：采用多肽制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体，为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank获得大鼠钠泵α2亚单位M1~M2膜外区截断性片段目的多肽（LAAMEDEPSNDN），采用9-氟甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成目的多肽，并采用碳化二亚胺法制备出多肽与孔戚血蓝素复合物，免疫新西兰大白兔，免疫4次后获得抗血清，测定其效价。随后采用protein A纯化IgG抗体，并将其用于大鼠主动脉血管平滑肌细胞钠泵α2亚单的组织学检测。结果（1）人工合成的大鼠钠泵α2亚单位截断性片段长13氨基酸残基（LAAMEDEPSNDN-C），理论相对分子质量：1408.48，质谱实测相对分子质量：1407.90；高效色谱分析纯度HPLC纯度>85.5%；（2）ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1∶512000，蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml，按照1∶1000稀释（终浓度1μg/ml），ELISA检测抗体效价为1∶256000；（3）该抗体按照1∶100~1∶200稀释可用于免疫细胞学检测。结论成功制备高效价抗钠泵α2亚单位截断性片段抗体可用于钠泵α2亚单位的ELISA和免疫细胞化学实验，为钠泵α2亚单位的组织细胞学检测和功能研究提供新的实验基础。