换一批
换一批真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型
Establishment of a chondrocyte degeneration model by over-expression of human Wnt7b gene in 293ft cell line
摘要目的：在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨，Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞，取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上，转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中，48 h后收集细胞上清及转染细胞，Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞，24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA，Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后，软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形，Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调，Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降，ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变，建立软骨细胞退变的体外模型。
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关键词
Wnt7b基因293ft细胞软骨细胞转染细胞退变Wnt7b gene293ft cell linechondrocytestransfectionchondrocytes degeneration
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1673-4254.2015.03.11
发布时间
2015-04-09
基金项目
国家自然科学基金(81073114，81072830)
上海市教委创新项目(11YZ64)
上海市高校青年教师培养资助计划(ZZszy12017)Supported by National Natural Science Foundation of China
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