血小板源性生长因子-BB对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响

Effect of platelet-derived growth factor-BB on rat corpus cavernosum smooth muscle cell proliferation, migration and phenotypic modulation

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摘要目的：了解血小板源性生长因子-BB（PDGFBBB）对大鼠阴茎海绵体平滑肌（CCSM）细胞增殖、迁移及表型转化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用改良的组织块培养法培养Wistar大鼠CCSM细胞，并用细胞免疫荧光法鉴定。利用CCK-8法检测不同浓度的PDGFBB对培养的大鼠CCSM细胞增殖的影响，并筛选出最适PDGFBB作用浓度。分别用0 ng/mL PDGFBB与最适浓度PDGFBB处理CCSM细胞，利用划痕实验检测PDGFBB对CCSM细胞迁移的影响，24 h和48 h时利用qRT-PCR检测细胞中转录因子myocardin及收缩型表型标志物α-SMA、SMMHC mRNA表达水平；用最适浓度PDGFBB处理CCSM细胞0、24和48 h后，利用western blotting检测细胞中myocardin的蛋白表达水平。结果原代培养的CCSM细胞中α-SMA和smoothelin阳性率分别约为96.5%和96%；不同浓度的PDGFBB均能明显促进CCSM细胞增殖，其最适浓度为12.5 ng/mL。PDGFBB（12.5 ng/mL）能促进CCSM细胞迁移，下调CCSM细胞中myocardin、α-SMA和SMMHC mRNA表达水平（P均<0.01）；在48 h内myocardin蛋白质的表达水平随着PDGFBB作用时间增加而降低。结论改良的组织块培养法可获得高纯的CCSM细胞；PDGFBB可促进CCSM细胞增殖、迁移，使细胞从收缩型向合成型转化，其机制可能是通过下调myocardin。