换一批Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力
Effect on Muc2 gene knockdown in Ht29 cells by CRISPR/Cas9 on probiotics-mediated inhibition of E.coli K1 adhesion and invasion
摘要目的：建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白Muc2在鼠李糖乳杆菌GG株（LGG）抑制大肠杆菌K1（Escherichia coli, E.coli k1）株E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法设计2个长20~25 bp的sgRNA分别靶向Muc2，合成sgRNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体，转染野生型人结肠癌Ht29细胞，蛋白免疫印迹法检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后，竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠上皮中的作用。结果目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确；稳定抑制Muc2表达的细胞株筛选成功；Muc2基因沉默后，与空白对照组相比，其表达水平明显降低，抑制率可达81%（P<0.01）；黏附侵袭实验中E44相对黏附率为72.23%（P<0.01），相对侵袭率为81.49%（P<0.01），益生菌LGG的抑制E44黏附和侵袭作用明显下调。结论Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力，提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一，并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。
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关键词
Muc2LGGE.coli K1CRISPER/Cas9Ht29侵袭Muc2Lactobacillus rhamnosus GGE.coli K1CRISPER-Cas9Ht29invasion
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-4254.2016.06.15
发布时间
2016-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
南方医科大学公卫学院院长基金（GW201518）
广东省省级大学生创新创业训练计划（201512121026）
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