换一批在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂
Transient expression of bioactive recombinant human plasminogen activator in tobacco leaf
摘要目的 探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径.方法 构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N.excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性.结果 病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N.benthamiana和N.excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N.benthamiana中rhPA的表达量略高于N.excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6％;表达的rhPA具有体外溶栓活性.Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒.结论 在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台.
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医学主题词
烟草(Tobacco)人(Persons)纤溶酶原激活剂(Plasminogen Activators)烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus)接种(Vaccination)
栏目名称
DOI
10.12122/j.issn.1673-4254.2019.05.03
发布时间
2019-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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