线粒体ALDH2对高糖处理的乳鼠心肌成纤维细胞中自噬相关蛋白影响

Effects of mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2 on autophagy-associated proteins in neonatal rat myocardial fibroblasts cultured in high glucose

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摘要目的探讨自噬是否介导乙醛脱氢酶(ALDH)2对高糖处理的乳鼠心肌成纤维细胞的作用.方法无菌条件下取出生3d内SD大鼠乳鼠心脏,剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶2混合酶消化成单个细胞,经差速贴壁后并传代培养,当传至3代时进行处理.应用免疫荧光检测培养的乳鼠心肌成纤维细胞内波形蛋白以此鉴定原代培养心肌成纤维细胞纯度;实验涉及如下分组:5.5 mmol/L糖对照组(F)、30 mmol/L高糖组(FH)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂(Alda-1)组(FHA)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2抑制剂(Daidzin)组(FHD)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂(Alda-1)和乙醛脱氢酶2抑制剂(Daidzin)(FHAD);Western blot检测ALDH2、微管相关蛋白1轻链3B亚基(LC3B)、Beclin-1的蛋白表达;羟脯胺酸试剂盒测定细胞培养液中羟脯胺酸含量;CCK-8试剂盒测定心肌成纤维细胞增殖能力.结果与F组相比,FH组ALDH2蛋白表达降低,Beclin-1、LC3B蛋白表达降低,细胞培养上清液内羟脯胺酸含量、细胞数目增高;与FH组相比,FHA组Beclin-1、LC3B蛋白表达、ALDH2蛋白表达增加,细胞数目、细胞内羟脯胺酸含量降低,与此同时FHD组ALDH2蛋白及Beclin-1、LC3B表达降低,细胞数目、细胞内羟脯胺酸含量增高.结论线粒体ALDH2抑制高糖诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖作用,其机制可能与ALDH2对自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B的上调作用有关.