慢性间歇性低氧大鼠肾组织差异蛋白的定量分析:基于TMT-PRM技术

Quantitative analysis of differential proteins in renal tissues of rats with chronic intermittent hypoxic exposure based on TMT and PRM technology

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摘要目的基于TMT-PRM技术研究慢性间歇性低氧大鼠肾脏组织的蛋白质组学,筛选差异表达蛋白以鉴定潜在的生物标志物.方法将20只SD大鼠随机分为正常组、实验组(n=10).实验组放入低氧舱内建立慢性间歇性低氧(CIH)大鼠模型.12周后采集肾脏样本,HE染色观察大鼠肾组织形态变化;提取蛋白并酶解和TMT标记,采用LC-MS/MS鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer2.4处理数据,进行生物信息学分析,以倍数变化1.2以上或低于0.83为标准,t检验P＜0.05作为差异表达蛋白,并应用PRM技术验证候选蛋白的表达情况.结果 CIH引起肾脏损伤,肾小球形态不规则,肾小管上皮细胞肿胀等.实验组与正常组比较,筛选出差异表达蛋白有31种,其中表达上调的22种,表达下调的9种.GO功能富集分析显示差异表达蛋白主要参与细胞黏附、缺氧应激、钙离子等生物学过程.KEGG通路富集分析结果显示差异表达蛋白涉及PPAR、AMPK、代谢途径等信号通路.PRM相对定量分析的目标蛋白中进行筛选,P07379(PCK1)、P19132(Fth1)、Q5XI79(Ndufaf7)3个蛋白与TMT定量蛋白质组结果趋势一致.结论应用TMT-PRM技术在慢性间歇性低氧大鼠肾组织筛选出差异表达蛋白有31种,其中P07379(PCK1)、P19132(Fth1)、Q5XI79(Ndufaf7)可能是与慢性间歇性低氧大鼠肾损伤密切相关的关键蛋白.