芪黄健脾滋肾颗粒可改善小鼠系统性红斑狼疮血小板减少:基于Ca2+/CaMKK2/AMPK/mTOR信号通路介导的自噬

Qihuang Jianpi Zishen Granules improves thrombocytopenia in mice with systemic lupus erythematosus by suppressing platelet autophagy via the Ca2+/CaMKK2/AMPK/mTOR signaling pathway

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摘要目的基于Ca2+/CaMMK2/AMPK/mTOR信号通路介导的自噬探讨芪黄健脾滋肾颗粒(QJZG)对小鼠系统性红斑狼疮血小板减少的影响.方法将24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、QJZG组、醋酸泼尼松(Pred)组、CaMKK2激活剂组,6只/组;另将6只C57BL/6小鼠设为正常对照(Control)组.Control组、模型组:予10mL/(kg·d)生理盐水灌胃;QJZG组:芪黄健脾滋肾颗粒+生理盐水配成0.39 g/mL溶液灌胃,剂量3.9 g/(kg·d);Pred组:予小鼠醋酸泼尼松片加生理盐水配成0.273 mg/mL的溶液灌胃,剂量2.73 mg/(kg.d);激活剂组:予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,另将小鼠腹腔注射CaMKK2激活剂,5 mg/kg,2次/周.检测血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV);ELISA法检测血清血小板生成素(TPO)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平;流式细胞术检测钙离子荧光强度;Real-time PCR 法检测血小板 CaMKK2、AMPK2α、mTOR、Beclin1、p62 mRNA 表达水平;Western blotting 检测血小板CaMKK2、p-CaMKK2、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、LC3、Beclin1、P62蛋白表达水平.结果与Control组相比,模型组PLT、PCT、IL-10、mTOR、p62 mRNA、p-mTOR、P62 水平降低(P＜0.01),PDW、MPV、TPO、IL-6、TNF-α、IFN-γ CaMKK2、AMPK、Bcl-1 mRNA、p-CaMKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白(LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白)在血小板内表达量升高(P＜0.01).与模型组比较,QJZG组及Pred组PLT、IL-10、mTOR、p62 mRNA、p-mTOR、P62水平升高(P＜0.01),MPV、TPO、IL-6、TNF-α、IFN-γ、CaMKK2、AMPK、Bcl-1 mRNA、p-CaMKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白(LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白)在血小板内表达量降低(P＜0.05);CaMKK2 激活剂组 PLT、PCT、IL-10、mTOR、p62 mRNA、p-mTOR、P62水平降低(P＜0.01),PDW、MPV、IL-6、TNF-α、IFN-γ、CaMKK2、AMPK、Bcl-1 mRNA、p-CaMKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白(LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白)在血小板内表达量升高(P＜0.01).结论 QJZG可通过减轻炎症及影响Ca2+/CaMKK2/AMPK/mTOR信号通路抑制血小板自噬改善系统性红斑狼疮血小板减少.