益气养阴化浊通络方通过调控miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导的线粒体自噬减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤

Yiqi Yangyin Huazhuo Tongluo Formula alleviates diabetic podocyte injury by regulating miR-21a-5p/FoxO1/PINK1-mediated mitochondrial autophagy

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摘要目的探讨益气养阴化浊通络方(YYHT)对高糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的保护作用及潜在机制.方法大鼠分别灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理盐水1周制备低、中、高浓度含药血清和空白血清.体外培养MPC5,分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、模型组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+NC+高浓度含药血清)、miR-21a-5p抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pinhibitor+空白血清).qRT-PCR 检测 miR-21a-5p 表达及FoxO1、PINK1、Parkin 的 mRNA 表达,Western blotting 检测足细胞标志蛋白(Nephrin、Podocin)及FoxO1、PINK1、Parkin蛋白表达,MDC染色检测自噬荧光.将MPC5分为阴性对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-NC+空白血清)、miR-21a-5p-mimic组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+高浓度含药血清),荧光素酶报告基因实验检测miR-21a-5p/FoxO1转录调控,RIP检测miR-21a-5p与靶基因FoxO1结合.结果与对照组相比,模型组miR-21a-5p表达升高(P＜0.05),FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达降低(P＜0.05),FoxO1、PINK1、Parkin、Nephrin、Podocin蛋白表达及自噬荧光降低(P＜0.05);与模型组相比,不同剂量YYHT含药血清及miR-21 a-5p-inhibitor促进Nephrin及Podocin蛋白表达(P＜0.05),抑制miR-21a-5p表达(P＜0.05),增强FoxO1、PINK1、Parkin 的mRNA和蛋白表达及自噬荧光(P＜0.05).与miR-21a-5p-NC组相比,miR-21a-5p-mimic组抑制FoxO1 转录(P＜0.05),促进miR-21a-5p与FoxO1的结合(P＜0.05);与miR-21a-5p组相比,YYHT含药血清组促进FoxO1转录(P＜0.05),抑制miR-21a-5p与FoxO1的结合(P＜0.05).结论益气养阴化浊通络方可能通过调节miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导的线粒体自噬,减轻高糖诱导的小鼠肾足细胞损伤.