摘要目的 观察慢性术后疼痛(CPSP)小鼠疼痛行为学指标的时间动态特征,并从背根神经节(DRG)层面初步筛选介导CPSP的关键物质.方法 采用足底切口术(INC)联合足背注射前列腺素E2(PGE2)建立慢性术后疼痛小鼠(I/P)模型.根据手术方式与给药不同,将小鼠随机分为假手术+生理盐水组(SI/NS)、假手术+PGE2组(SI/PGE2)和手术+PGE2组(I/P),观察实验小鼠造模后不同时间点机械缩足阈(PWTs)、热缩足潜伏期(PWLs)和冷缩足反应时间(WDs)变化.根据给药和取材时间不同,将小鼠分为SI/NS组、模型第1天组、模型第8天组,利用RNA-Seq技术建立CPSP早期(PGE2诱导后第1天)和维持期(PGE2诱导后第8天)小鼠背根神经节基因表达谱,通过样本相关性分析、差异表达基因分析、富集分析筛选重要介导物质,采用RT-qPCR和ELISA检测目标物质基因及蛋白表达情况.根据手术方式与给药不同,将小鼠随机分为SI/P+Veh组、I/P+Veh组、I/P+药物组,通过鞘内注射CX3CL1中和抗体(Ab)或CX3CR1选择性拮抗剂(JMS-17-2)等药理学实验,探索下游相关受体的作用.结果 I/P小鼠足底切口疼痛在术后14 d内恢复,经PGE2二次诱发后PWTs持续降低至PGE2注射后第10天WDs持续延长至第12天;PWLs未发生持续性变化.生信分析显示,CPSP早期和维持期实验小鼠DRG差异表达基因为975、895个,共同参与介导的交集差异基因524个.富集分析表明"细胞膜"富集基因数目最多,涉102个基因;"质膜"富集显著性最大(P<0.001);"CX3C 趋化因子受体结合"等条目富集因子最大(Rich Factor=1).与SI/NS组相比,CPSP早期趋化因子相关差异基因中表达差异最大为Cx3cl1(FCCx3cl1=2.08),其次为Cxcl14(FCCxcl14=1.99).RT-qPCR和ELISA结果显示CPSP早期I/P小鼠患侧DRG中Cx3cl1、Cxcl14基因和相关蛋白表达较SI/NS组增加(P<0.05),维持期小鼠则较早期组降低(P<0.05).PGE2诱导前鞘内注射CX3CL1中和抗体可阻止CPSP发生.单次鞘内注射CX3CR1拮抗剂可一定程度翻转CPSP维持期疼痛.结论 CPSP小鼠机械痛觉异常、冷痛觉异常持续至PGE2注射后第10天,热痛觉敏化不显著.背根神经节趋化因子尤其是CX3CL1可能介导慢性术后疼痛发生.