人鼻粘膜类器官EB病毒感染模型的建立
Establishment of an Epstein-Barr virus infection model using human nasal organoids
摘要目的 开发一种经济、简便的人鼻粘膜类器官培养方法,用于建立EB病毒(EBV)体外感染模型.方法 从手术获得的鼻息肉组织,经清洗、剪切、消化、过滤后得到细胞团,在无基质胶的条件下经动态悬浮培养扩增为未分化的鼻粘膜类器官,再通过14 d的促分化处理以形成分化的鼻粘膜类器官,通过免疫荧光、免疫组化鉴定类器官主要细胞组成.加入EBV体外感染鼻粘膜类器官,通过RT-qPCR检测病毒特异性基因EBNA1、BALF5的表达,并通过EBNA1免疫荧光染色确认病毒感染.结果 动态悬浮培养法可在无基质胶的培养体系中,成功培养出由基底细胞、粘液细胞、纤毛细胞构成的鼻粘膜类器官.分化的鼻粘膜类器官高表达EBV相关受体EphA2、NRP1、NMHCⅡ-A.未分化和分化的鼻粘膜类器官均可被EBV感染,类器官中病毒复制随病毒暴露载量的增加而增加,分化类器官可能更有利于病毒复制(P<0.001).结论 无基质胶的动态悬浮培养法是一种经济、简便的鼻粘膜类器官建模方法,人鼻粘膜类器官能够作为EBV感染模型,为上皮EBV感染相关研究提供一个良好的平台.
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