摘要目的 优化白芍提取工艺,建立白芍提取物(BST)多指标含量检测方法,并初步探讨其对小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)的酪氨酸酶(TYR)活性抑制作用和对人永生化表皮细胞(HaCaT)中ROS水平的降低作用,并对BST对体内小鼠模型治疗效果进行评估.方法 以分子对接手段确定潜在TYR抑制剂成分为没食子酸、甘草苷及芍药苷;采用高效液相色谱法(HPLC)建立BST液相图谱,测定3种潜在TYR抑制剂的含量,并进行方法学验证;通过熵权法计算3种潜在TYR抑制剂的含量、TYR抑制活性及DPPH及自由基清除能力的综合评分作为响应值,采用单因素结合响应面分析法考察溶剂配比、液料比、提取时间以及粉碎目数等因素对BST提取工艺的影响,以确定最优提取工艺;通过设置黑色素-酪氨酸酶B16F10细胞实验空白组(正常培养)、模型组(α-MSH处理)、给药组(α-MSH+BST)、Hacat细胞体外抗氧化活性试验空白组[正常培养,模型组双氧水(H2O2)处理)、给药组(H2O2+BST处理)以验证作用机制.通过UVB辐射暴露系统建立小鼠黑色素瘤模型,BST(100、150、200 mg/kg)给予0.2 mL的混悬液灌胃,结合观察实验动物背部皮肤状态、Fontana-Masson银染色结果以及检测血清样本中参与调控黑色素生成、转运或代谢及抗炎相关细胞因子水平指标综合评估BST体内美白作用效果.结果 分子对接结果显示BST中潜在TYR抑制剂与TYR蛋白结构的残基存在相互作用关系,建立了BST潜在TYR抑制剂的HPLC含量测定方法,方法学验证表明该方法稳定可行;单因素-响应面实验表明BST最优提取工艺为提取溶剂50%乙醇,液料比1∶15,提取时间1h,粉碎目数20目;BST对DPPH自由基以及羟自由基具有直接清除作用,能显著减少细胞中黑色素的形成并提高B16细胞内TYR蛋白的相对含量并降低HaCat细胞中ROS水平,并在体内通过抑制TYR与TNF-α(P<0.01)直接抑制黑色素合成关键酶与间接抗炎的双重美白机制,双向调节色素代谢,有效逆转UVB诱导的皮肤光老化及色素沉着.结论 基于单因素响应面法优化的BST提取工艺稳定可靠、预测性良好,药理分析研究表明BST的美白作用可能是通过抑制TYR活性和调节氧化应激和炎症通路的双向调节机制而实现的.