摘要目的 基于网络药理学、计算生物学及体外实验,系统筛选并验证杨梅酮抑制膀胱癌的潜在作用靶点及其分子机制.方法 通过Swiss Target Prediction与SEA Search Server平台预测杨梅酮作用靶点,基于TCGA转录组数据与FinnGen血浆蛋白质组数据筛选膀胱癌相关靶点,取交集获得杨梅酮抗膀胱癌潜在靶点,构建蛋白质相互作用网络,进行GO与KEGG富集分析.采用Discovery Studio 2019进行分子对接与分子动力学模拟验证杨梅酮与核心靶点的结合能力与稳定性.通过氨基酸残基虚拟突变验证杨梅酮特异性结合HSP90AA1.通过公开单细胞转录组数据及CRISPR筛选数据,分析核心靶点HSP90AA1在膀胱癌中的细胞特异性与功能必要性.采用CCK-8、克隆形成、划痕实验、qRT-PCR及Western blotting等方法,在UM-UC-3细胞中验证杨梅酮对细胞增殖、迁移能力的影响,并检测其对HSP90AA1及PI3K-AKT信号通路关键蛋白表达的调控作用.结果 共筛选出30个杨梅酮抗膀胱癌潜在靶点,其中HSP90AA1被确定为最核心的靶点.KEGG富集分析提示这些基因显著富集于PI3K-AKT信号通路.分子对接与动力学模拟表明,杨梅酮与HSP90AA1蛋白具有较高的结合亲和力与稳定的结合构象.生物信息学分析显示,HSP90AA1在膀胱癌尿路上皮细胞中特异性高表达,是膀胱癌细胞的潜在治疗靶点,且其高表达与不良无进展生存期(PFS)显著相关.体外实验显示,杨梅酮可浓度依赖性地抑制UM-UC-3细胞的增殖与迁移(P<0.05),并下调HSP90AA1 mRNA及HSP90AA1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平(P<0.05).结论 杨梅酮可能通过特异性靶向HSP90AA1,调控PI3K-AKT信号通路,从而抑制膀胱癌UM-UC-3细胞的增殖与迁移能力.