换一批人乳头状瘤病毒E6和E7蛋白过表达慢病毒载体构建及稳定转染喉上皮细胞系的建立
Construction of lentivirus vector with overexpression of human papillomavirus E6 and E7 protein and establishment of stable transfection into laryngeal epithelial cell line
摘要目的 分别构建过表达人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6型和11型的E6、E7癌基因的慢病毒载体,建立HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的SNU-1076喉上皮细胞系模型.方法 分别合成表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的片段,构建重组慢病毒载体pHBLV-CMV-h-HPV6-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro 和pHBLV-CMV-h-HPV11-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro.包装慢病毒后转染进入人喉上皮细胞系SNU-1076,经嘌呤霉素抗性筛选得到阳性克隆.采用实时定量PCR法分别检测HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的水平.结果 通过测序验证质粒构建的成功.实时荧光定量PCR的结果显示,转染HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的SNU-1076细胞系相较于转染对照空载体的细胞系出现了明显的扩增曲线.其中HPV6-E6-E7的过表达效果为41 692倍,HPV11-E6-E7的过表达效果为124 957倍.结论 利用慢病毒法成功分别建立了过表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7的喉上皮SNU-1076细胞系.
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