换一批
换一批干扰RNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对骨肉瘤细胞VEGF表达的影响
Effect of Silencing HIF-1α by RNA Interference on Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in Osteosarcoma Cell Line SaOS-2 under Hypoxia
摘要背景与目的:研究表明HIF-1α是肿瘤适应低氧微环境、诱导血管新生的一个主要调控因子.本研究通过观察体外低氧培养条件下骨肉瘤细胞系SaOS-2中HIF-1α和VEGF的表达,探讨HIF-1α在骨肉瘤缺氧激活血管新生调控途径中的作用.方法:CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境.半定量RT-PCR和免疫组化法分别检测不同缺氧时相中HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达.构建针对HIF-1α的短发夹状小干扰RNA真核表达载体并转染SaOS-2细胞.免疫印迹沉淀观察转染后HIF-1α的基因沉默效果,RT-PCR和ELISA双抗体夹心法检测HIF-1α短基因沉默后SaOS-2细胞中VEGF的变化.结果:低氧条件下,SaOS-2细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高;而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高.构建的HIF-1α短发夹状小干扰RNA表达载体转染SaOS-2细胞后能够显著下调HIF-1α基因的表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制.结论:缺氧促使SaOS-2细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,HIF-1α通过转录激活VEGF的机制促进骨肉瘤缺氧状态下的血管新生.
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主题词
低氧(Hypoxia)骨肉瘤(Osteosarcoma)细胞(Cells)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)蛋白(Egg White)
分类号
R738
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1000-467X.2005.05.004
发布时间
2005-06-02
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