bcl-xL短发夹状RNA诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡

Inducing Apoptosis of Human Nasopharyngeal Carcinoma Cell Line CNE-2Z by bcl-xL Short hairpin RNA

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摘要背景与目的:实验证明bcl-xL在鼻咽癌细胞株CNE-2Z中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展、转移及治疗过程中产生耐药等方面发挥重要作用.本研究拟探讨bcl-xL短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)诱导CNE-2Z细胞凋亡的作用.方法:把表达bcl-xLshRNA的重组质粒pmU6-RNAi转染到CNE-2Z细胞中,用荧光染色和流式细胞术等方法检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测bcl-xL、bcl-2、survivin 和caspase-3的mRNA表达水平;用Western blot检测Bcl-xL、Caspase-3和P53的蛋白表达水平.结果:流式细胞术检测发现,pmU6-RNAi重组质粒作用24 h后,细胞出现明显的凋亡峰;Hoechst 33258单染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩和核断裂;RT-PCR分析pmU6-RNAi重组质粒作用细胞后明显下调了bcl-xL、bcl-2和caspase-3的mRNA表达水平,对survivin的mRNA表达水平无影响;Western blot分析pmU6-RNAi质粒作用细胞后明显下调了Bcl-xL、Caspase-3的蛋白表达水平,而大幅度上调了P53的蛋白表达水平.结论:bcl-xL shRNA可诱导CNE-2Z细胞凋亡;CNE-2Z细胞的凋亡可能与bcl-2、caspase-3和p53有着密切的关系;质粒表达的bcl-xL shRNA为开发鼻咽癌的基因治疗药物提供实验依据.